文章背景簡介   

細胞遷移依賴于細胞與細胞外基質的相互作用。整合素受體可以結合細胞外基質配體并調節(jié)細胞骨架和信號變化。當整合素與talin等FERM（(protein 4.1, Ezrin, Radixin, Moesin family）結構域蛋白結合時，會增加其與細胞外基質配體的親和力，整合素會聚集成新生的局灶性復合物并募集額外的蛋白質，形成長而穩(wěn)定的粘著斑（FAs）。隨著細胞的遷移，穩(wěn)定的FAs將被拆解從而使細胞膜收縮.

MAP4K4（絲裂原激活蛋白激酶4）屬于STE20家族激酶，它們廣泛表達并影響胚胎發(fā)育、炎癥等許多生物學過程。MAP4K4會通過未知的機制調節(jié)在人體環(huán)境中的多種分子途徑（包括整合素生物學）。

moesin、ezrin和radixin構成ERM蛋白家族（ERMs），是MAP4K4的底物。與talin一樣，ERMs包含一個結合跨膜蛋白的氨基末端FERM結構域和一個結合肌動蛋白的羧基末端尾。磷酸化后，這兩個結構域解離并在肌動蛋白和血漿膜之間形成系鏈，以調節(jié)細胞-細胞粘附、內吞、細胞極性和有絲分裂。ERMS定位會影響不同類型細胞的收縮，但它們在這方面的作用機制仍不清楚。

美國Genentech公司及田納西州St Jude兒童研究醫(yī)院的Philip Vitorino , Stacey Yeung, Ailey Crow等人2015年在《Nature》雜志上（IF2018= 41.577；1區(qū)）發(fā)表了題為“MAP4K4 regulates integrin-FERM binding to control endothelial cell motility”的文章。報告了調節(jié)內皮細胞運動的新機制：MAP4K4磷酸化moesin，將talin從整合素β1中置換，使整合素β1失活并促進FA的分解，從而在內皮細胞遷移過程中使膜收縮。同時還發(fā)現了抑制MAP4K4從而阻礙體內病理血管生成的化學抑制劑，揭示了干預病理血管生成的新方法。

所用到的主要方法

1.3D細胞培養(yǎng)

2.劃痕實驗

3.EdU檢測

4.免疫組化

5.蛋白質印跡分析

6.transwell遷移實驗

7.慢病毒轉染及穩(wěn)轉細胞系構建

8.實時熒光定量PCR（Q-PCR/Real-time PCR）

9.流式細胞熒光分選技術

10.細胞免疫熒光標記法（immunofluorescence）

11.條件性/誘導性基因敲除MAP4K4小鼠的建立

文章主要內容摘要

細胞遷移是一個多個分子機制逐步協(xié)作的過程。本文通過小干擾RNA和化學抑制劑的體外血管生成篩選技術，發(fā)現了MAP4K4-moesin-talin-β1-整和素分子途徑，該途徑在內皮細胞遷移過程中能有效的促進質膜收縮。MAP4K4缺失會降低細胞膜動力學，減緩內皮細胞遷移，并損害體外和體內的血管生成。在遷移的內皮細胞中，MAP4K4可使moesin磷酸化并進而使FA分解，從而使膜回縮。進一步分析表明moesin可在MAP4K4下游通過與talin競爭結合整合素β1胞內結構域來使整和素失活。因此，moesin（由msn基因編碼）或map4k4的缺失降低了內皮細胞的黏附分解率。此外，α5β1-整聯(lián)蛋白阻斷逆轉了與體外和體內Map4k4缺失相關的膜回縮缺陷。本文研究揭示了內皮細胞遷移的一個新機制。此外，MAP4K4功能喪失可抑制疾病模型中的病理性血管生成，這也表明MAP4K4可作為潛在的治療靶標。

FGF1對TGF-β1誘導EMT過程的增強作用需要后者引發(fā)整合素αvβ3的過表達