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文章背景簡(jiǎn)介

BACKGROUND INTRODUCTION

宮頸癌是全球第四大女性常見癌癥，造成了巨大的疾病負(fù)擔(dān)，特別是對(duì)低收入或中等收入家庭。此外，子宮頸癌是女性中第二大致命性癌癥，預(yù)后差，生存率低。因此，人們對(duì)宮頸癌的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了廣泛的探索。

環(huán)狀RNA(circRNA)是一種閉環(huán)結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子，已被證明參與宮頸癌的發(fā)展，其功能是調(diào)控基因表達(dá)。在之前的研究中，環(huán)狀RNA被報(bào)道為宮頸癌的生物標(biāo)志物。例如circ-0031288與宮頸癌細(xì)胞的遷移、侵襲和增殖有關(guān)；Circ同源結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)被發(fā)現(xiàn)可促進(jìn)宮頸癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，加速宮頸癌的進(jìn)展。有報(bào)道稱Circ-0000520在胃癌和肝細(xì)胞癌中異常表達(dá)，hsa-circ-0000520如何在宮頸癌中發(fā)揮作用仍有待研究。

有研究表明miR-1296參與了宮頸癌細(xì)胞的凋亡，然而miR-1296參與的詳細(xì)調(diào)控機(jī)制在很大程度上仍然有待闡明。環(huán)狀RNA被證明與microRNAs (miRNAs)結(jié)合，并影響不同癌癥的發(fā)展，例如，hsa-circ-0005576被發(fā)現(xiàn)可調(diào)節(jié)宮頸癌細(xì)胞中miR-153的表達(dá)。Hsa-circ-0000520與miR-1296之間的相互調(diào)節(jié)機(jī)制尚未有研究報(bào)道。

蘇州科技城醫(yī)院病理科的Qingling Zheng等于2021年在《Journal of Translational Medicine》（IF=6.1，Q2，Top）發(fā)表了《Hsa-circ-0000520 overexpression increases CDK2 expression via miR-1296 to facilitate cervical cancer cell proliferation》。論文旨在研究hsa-circ-0000520在宮頸癌中的作用及其潛在的調(diào)控機(jī)制，確定宮頸癌的潛在治療靶點(diǎn)。

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所用到的主要方法

METHODS

1、生物信息學(xué)分析

2、臨床樣品及細(xì)胞培養(yǎng)

3、RT - qPCR和Western blot分析

4、雙熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定

5、免疫組織化學(xué)(IHC)

6、RNase R線性RNA消化實(shí)驗(yàn)

7、RNA熒光原位雜交(FISH)

8、細(xì)胞轉(zhuǎn)染

9、克隆形成實(shí)驗(yàn)

10、細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(CCK - 8)測(cè)定

11、5 - 乙炔 - 2′ - 脫氧尿苷(EdU)測(cè)定法

12、RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)測(cè)定

13、流式細(xì)胞術(shù)

14、裸鼠移植瘤的形成

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文章摘要

ABSTRACT

論文首先通過生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)了hsa-circ-0000520在宮頸癌中的作用，結(jié)果顯示hsa-circ-0000520在宮頸癌中高表達(dá)�；�于生物信息學(xué)的結(jié)果作者對(duì)52對(duì)臨床標(biāo)本中采集的宮頸癌組織及癌旁正常組織進(jìn)行RT-qPCR，確定了hsa-circ-0000520在宮頸癌組織和細(xì)胞中的高表達(dá)。RNase R消化實(shí)驗(yàn)證實(shí)hsa-circ-0000520具有環(huán)狀RNA的特性，核質(zhì)分離和FISH實(shí)驗(yàn)顯示hsa-circ-0000520主要定位于細(xì)胞質(zhì)。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示：沉默hsa-circ-0000520可抑制癌細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，宮頸癌細(xì)胞的增殖能力顯著下降，細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，S期細(xì)胞減少。研究發(fā)現(xiàn)hsa-circ-0000520缺失誘導(dǎo)P21和P27表達(dá)增加，細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CyclinD1表達(dá)降低，凋亡相關(guān)蛋白Bax表達(dá)增加，Bcl-2表達(dá)減少。因此，沉默hsa- circ-0000520能夠阻斷宮頸癌細(xì)胞周期的進(jìn)展。

生物信息學(xué)分析和雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)都揭示了hsa-circ-0000520與miR-1296之間的靶向關(guān)系，兩者存在結(jié)合位點(diǎn)，過表達(dá)hsa-circ-0000520可以抑制miR-1296的表達(dá)。沉默hsa-circ-0000520或過表達(dá)miR-1296會(huì)抑制CDK2的表達(dá)，而抑制miR-1296則會(huì)增加CDK2的表達(dá)。

TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)分析和RT-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CDK2在宮頸癌中高表達(dá)，雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)miR-1296與CDK2存在結(jié)合位點(diǎn)。隨后，研究證明hsa-circ-0000520介導(dǎo)的miR-1296抑制能夠促進(jìn)CDK2在宮頸癌中的表達(dá)。

論文進(jìn)一步通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證hsa-circ-0000520/miR-1296/CDK2在宮頸癌中的作用。裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，沉默hsa-circ-0000520或CDK2可減輕移植瘤的重量和體積，抑制移植瘤的生長(zhǎng)，而過表達(dá)CDK2則會(huì)促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。

因此，論文實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示了hsa-circ-0000520通過抑制miR-1296表達(dá)，進(jìn)而上調(diào)CDK2，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖和腫瘤形成的分子機(jī)制，提示hsa-circ-0000520作為宮頸癌預(yù)后判斷的生物標(biāo)志物和潛在治療靶點(diǎn)的重要性。

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文章主要內(nèi)容

CONTENT

（1）對(duì)臨床標(biāo)本中采集的52對(duì)宮頸癌組織及癌旁正常組織進(jìn)行RT-qPCR，結(jié)果顯示Hsa-circ-0000520在宮頸癌細(xì)胞中高表達(dá)。

（2）hsa-circ-0000520調(diào)節(jié)了細(xì)胞周期的分布并且能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖。

（3）hsa-circ-0000520可以與miR-1296結(jié)合，miR-1296在宮頸癌組織中的表達(dá)降低，Hsa-circ-0000520能夠抑制miR - 1296的表達(dá)，并且兩者可以結(jié)合共同發(fā)揮作用。

（4）Hsa-circ-0000520能夠通過與miR - 1296結(jié)合調(diào)控CDK2的表達(dá)。

（5）沉默hsa-circ-0000520可通過miR - 1296抑制宮頸癌細(xì)胞增殖。

（6）Hsa-circ-0000520敲低通過miR - 1296下調(diào)CDK2抑制宮頸癌細(xì)胞增殖。

（7）通過裸鼠腫瘤發(fā)生研究驗(yàn)證Hsa-circ-0000520 在體內(nèi)通過miR - 1296/CDK2軸促進(jìn)人宮頸癌細(xì)胞的腫瘤發(fā)生。

       原文標(biāo)題 : 環(huán)狀RNA Hsa-circ-0000520通過miR-1296增加CDK2表達(dá)，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖